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公司新闻/正文
大鼠脑立体定位仪的实验
776 人阅读发布时间：2020-04-02 23:03
1 资料与方法
1.1 动物与试剂 健康幼年 Wistar大鼠 5 只, 体重(120 ±10)g, 用于提取 BMCs;健康成年 Wistar大鼠 30 只, 体
重(300 ±10)g, 用于制作缺血性脑卒中模型。 所有大鼠均雌 雄不限, 且由吉林大学实验动物中心提供。 DMEM培养基、 胎牛血清购自 Sigma公司, 大鼠脑立体定位仪购自北京智鼠多宝公司;ERK**组化试剂盒购自武汉博士德公司。
1.2 方法
1.2.1 大鼠 MSCs的分离、培养及收集 联**用密度梯度离心及贴壁法分离培养大鼠 MSCs,原代培养达 80%以上融合后按 1∶3传代培养, 选取生长良好的 1、 2、3代细胞, 用 0.25%胰蛋白酶室温消化 5min, 用含胎牛血清的培养液终 止消化, PBS清洗, 1000r/min离心, 每次 5min,共离心 3 次, 然后收集培养的大鼠 MSCs用于移植。
1.2.2 大鼠分组及缺血性脑卒中模型制作 30 只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和 BMCs移植组, 每组 10只。 采用 Longa[ 2]方法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模 型。 麻醉清醒后 2h采用 Longa[ 2]的评分方法进行评分。 0分和4分的动物弃之不用。 假手术组只行开颅术, 不凝闭大脑中动脉。
1.2.3 MSCs的移植 于造模术后 1w行细胞移植实验。 在脑梗死侧(右侧)壳核区于立体定向仪定位下进行直接注射移植。 移植组注射 MSCs悬液 5μl, 其他两组大鼠于相同部位注射同等量不含细胞的 0.1mol/LPBS。
1.3 观察指标
1.3.1 神经功能损伤程度评分(NSS) 分别于造模前、 移植前及移植后第 4周对各组动物进行 NSS, 评分标准参考
Chen等[ 3]方法, 主要观察运动、感觉功能、平衡能力及生理反 射能力;总分为 18分, 正常为 0分, 分值越高其神经损害程度越严重。
1.3.2 **组化染色 移植后第 4周, 每组取 5只处死大鼠取脑组织。 脑组织用生理盐水和先后经心灌
注固定, 石蜡包埋, 冠状切片。 严格按照**组化试剂盒说明书操作进行脑组织**组化染色检测 ERK蛋白表达。 显微镜下任选 5个 400倍视野计数阳性细胞。1.3.3 脑梗死体积检测 移植后第 4周, 各组剩余大鼠处死, 取脑, 于 20℃冷冻 20min, 冠状切片, 由前到后, 共 5 张切片, 置 2%TTC液中, 37℃避光孵育 30min,梗死区不着 色, 正常脑组织染成红色, 随即采用 40g/L甲醛固定, 根据苍 白区观察梗死灶范围 , 依据公式计算梗死面积[ 4] 。
1.4 统计学方法 实验数据以均数 ±标准差表示, 应用 SPSS13.0进行方差分析和 t检验。
品牌：智鼠多宝
1.1 动物与试剂 健康幼年 Wistar大鼠 5 只, 体重(120 ±10)g, 用于提取 BMCs;健康成年 Wistar大鼠 30 只, 体
重(300 ±10)g, 用于制作缺血性脑卒中模型。 所有大鼠均雌 雄不限, 且由吉林大学实验动物中心提供。 DMEM培养基、 胎牛血清购自 Sigma公司, 大鼠脑立体定位仪购自北京智鼠多宝公司;ERK**组化试剂盒购自武汉博士德公司。
1.2 方法
1.2.1 大鼠 MSCs的分离、培养及收集 联**用密度梯度离心及贴壁法分离培养大鼠 MSCs,原代培养达 80%以上融合后按 1∶3传代培养, 选取生长良好的 1、 2、3代细胞, 用 0.25%胰蛋白酶室温消化 5min, 用含胎牛血清的培养液终 止消化, PBS清洗, 1000r/min离心, 每次 5min,共离心 3 次, 然后收集培养的大鼠 MSCs用于移植。
1.2.2 大鼠分组及缺血性脑卒中模型制作 30 只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和 BMCs移植组, 每组 10只。 采用 Longa[ 2]方法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模 型。 麻醉清醒后 2h采用 Longa[ 2]的评分方法进行评分。 0分和4分的动物弃之不用。 假手术组只行开颅术, 不凝闭大脑中动脉。
1.2.3 MSCs的移植 于造模术后 1w行细胞移植实验。 在脑梗死侧(右侧)壳核区于立体定向仪定位下进行直接注射移植。 移植组注射 MSCs悬液 5μl, 其他两组大鼠于相同部位注射同等量不含细胞的 0.1mol/LPBS。
1.3 观察指标
1.3.1 神经功能损伤程度评分(NSS) 分别于造模前、 移植前及移植后第 4周对各组动物进行 NSS, 评分标准参考
Chen等[ 3]方法, 主要观察运动、感觉功能、平衡能力及生理反 射能力;总分为 18分, 正常为 0分, 分值越高其神经损害程度越严重。
1.3.2 **组化染色 移植后第 4周, 每组取 5只处死大鼠取脑组织。 脑组织用生理盐水和先后经心灌
注固定, 石蜡包埋, 冠状切片。 严格按照**组化试剂盒说明书操作进行脑组织**组化染色检测 ERK蛋白表达。 显微镜下任选 5个 400倍视野计数阳性细胞。1.3.3 脑梗死体积检测 移植后第 4周, 各组剩余大鼠处死, 取脑, 于 20℃冷冻 20min, 冠状切片, 由前到后, 共 5 张切片, 置 2%TTC液中, 37℃避光孵育 30min,梗死区不着 色, 正常脑组织染成红色, 随即采用 40g/L甲醛固定, 根据苍 白区观察梗死灶范围 , 依据公式计算梗死面积[ 4] 。
1.4 统计学方法 实验数据以均数 ±标准差表示, 应用 SPSS13.0进行方差分析和 t检验。
品牌：智鼠多宝